Rolling Circle Amplification

L’amplification d’ADN par Rolling Circle Amplification (RCA PCR) est une technique qui est notamment utilisée pour amplifier des génomes circulaires entiers tels que des génomes viraux circulaires, de l’ADN mitochondriale et des génomes microbiens d’une taille allant jusqu’à 6,5 Mb. Cette méthode repose sur les propriétés de l’ADN polymérase Φ29. Cette dernière possède une activité de proofreading (relecture) importante et une processivité lui permettant de polymériser plus de 70 000 nucléotides sans se détacher de l’ADN matriciel.

Grâce à cette technique, SMALTIS vous propose d’amplifier spécifiquement par RCA vos marqueurs ADN circulaire d’intérêt présents en très petite quantité dans vos échantillons complexes. Les amplicons seront ensuite détectés et quantifiés spécifiquement soit par PCR en temps réel soit par des expériences de Southern blotting.

Suivant vos besoins nos collaborateurs réaliseront votre projet selon plusieurs étapes :

Etape 1 : Etude de faisabilité

Cette étape comprend une revue de la littérature pour analyser les données déjà existantes et une analyse bio-informatique des séquences d’intérêt. Cela permettra à nos experts :

      - de concevoir et dessiner des primers et des sondes spécifiques
      - de mettre au point la méthode de RCA PCR sur vos échantillons
      - de déterminer les conditions d’amplification optimales
      - de vérifier la spécificité des primers et des sondes
      - de mettre ou point la méthode de détection et de quantification

Lors de cette étape, l’analyse d’un nombre limité d’échantillons sera également réalisée pour valider la méthode et un rapport d’analyse détaillé et illustré sera rédigé.

Etape 2 : Analyse de routine

Cette étape permettra d’analyser l’ensemble de vos échantillons grâce à la méthode préalablement validée.

Exemples de réalisations :

    - Détection de virus endogènes Humains (HERV) à partir de culots cellulaires.
      - Détection et quantification de virus endogènes Humains (HERV) à partir d’échantillons de sang prélevés à l’aide de la technologie PAXGene®.

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Nos services : 

PCR & Séquençage
Quantification de l'expression génique